生物胺(biogenicamine，BA)是一类低分子质量的碱性多胺，具有生物活性，普遍存在于生物体的细胞中，是细胞内的正常活性成分。微量的生物胺对人体有益，可以促进人体的生长发育和新陈代谢，提高肠道系统的免疫能力。但是，当人体吸收过量的生物胺后，会出现头痛、血压变化、心悸等严重后果。此外，生物胺还是生成致癌物质亚硝胺的前体物质，如腐胺和尸胺，不仅能增强组胺的毒性，而且还能与亚硝酸盐反应生成亚硝基胺，严重威胁人体健康和生命安全。

　　生物胺是由游离氨基酸在微生物产生的脱羧酶作用下而生成，也可以是醛被胺化作用后产生，食品在发酵或腐烂过程中会产生生物胺[5]。生物胺广泛存在于发酵乳制品、酒类、水产品、肉类产品、调味液等富含蛋白质和氨基酸的食品中。用于食品中生物胺测定的方法主要有电化学法[13]、色谱法、酶联免疫法等。目前，酒中生物胺的研究多集中于葡萄酒、啤酒、桑果酒及黄酒，而白酒中生物胺检测方法、生物胺种类和含量的研究报道比较少见。本研究建立的方法简便、快捷、准确，可以用于白酒中8种生物胺的同时测定。

　　1材料与方法

　　1.1材料、试剂及仪器

　　标准溶液配制：准确称取适量色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺标准品于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液，0～4℃保存。根据需要将标准储备液稀释成相应浓度的标准溶液。

　　试剂及耗材：正己烷、甲醇和丙酮（均为色谱纯），德国Merk公司；乙醚、正丁醇、三氯甲烷、谷氨酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、盐酸（均为分析纯），广州试剂厂；色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、精胺和亚精胺，美国Sigma公司；酪胺，德国Dr公司；丹磺酰氯（纯度均大于98%）、组胺（纯度＞96%），FLUKA公司。

　　仪器设备：HPLCWaterse2695配Waterse2489紫外检测器，美国Waters公司；3K15冷冻离心机，德国Sigma公司；VORTEX-2旋涡混合器，美国GENE公司；HH-2数显恒温水浴锅，中国晶波；Turbovaplv浓缩氮吹仪，美国caliper公司；TP-214型分析天平，美国DENVER；Orion868酸度计，美国Orion公司；Milli-Q超纯水器，美国Millipore公司；0.22μm滤膜针头滤器，上海安谱。Thermo移液枪（200～1000μL），美国ThermoFisher公司。

　　1.2液相色谱条件

　　色谱柱：Venusil?XBPC18柱（250?mm?×4.6?mm，内径3?μm）；检测器波长254nm，进样量20μL，柱温30℃，流动相A为甲醇，B为超纯水，流速1.5?mL/min。

　　1.3样品的萃取和衍生

　　量取20.00mL水样，滤纸过滤，滤液加氯化钠至饱和（若水样中含有油脂则加入10?mL正己烷，混匀，弃去上层有机相）。量取5?mL滤液于15?mL离心管中，用0.1mol/L的氢氧化钠调节pH值到12.0，加入5.0?mL正丁醇和三氯甲烷（1∶1，V/V）混合溶液，漩涡振荡2?min后以5000r/min离心5min，保留上层有机相，重复上述萃取2次，合并萃取液。量取3.0?mL萃取液并加入浓度1mol/L盐酸0.2?mL，60℃氮吹近干，用0.1?mol/L的盐酸定容至1mL，待衍生。

　　精确量取1.0?mL待衍生的试样溶液后，加入1.5?mL饱和碳酸氢钠溶液和1.0?mL丹磺酰氯衍生溶液（10mg/L丙酮溶液），充分混匀。在60℃水浴条件下反应30?min，再加入谷氨酸钠溶液100?μL，充分混匀，60℃保温15?min。取出，加入超纯水l?mL，40℃氮吹除去丙酮，之后加入乙醚3?mL，漩涡振荡1?min，静置分层后，吸取乙醚层，重复操作2次，合并乙醚提取液，40℃条件下氮气吹至近干，加入1.0?mL乙腈，溶液用0.22?μm滤膜过滤，滤液待测。

　　2?结果与讨论

　　2.1?线性关系和检出限

　　按照1.1中的方法配制8种生物胺的混合标准溶液进行线性实验，标准质量浓度为1.0?mg/L、2.50mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、25.0mg/L、50.0?mg/L。按照1.3中的方法进行衍生，通过HPLC进行测定。以3倍信噪比作为检出限的确定标准，以10倍信噪比作为定量限的确定标准。

　　8种生物胺色谱峰无重叠，分离较好。8种生物胺在1.0～50.0mg/L范围内呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.996。各组分生物胺的检出限(LOD)为0.01～0.10mg/L，定量检出限(LOQ)为0.03～0.30mg/L，满足生物胺检测的要求。

　　2.2?重复性的测定

　　对8种生物胺混标进行重复测定(n=5),结果见表3。结果显示相对标准偏差RSD≤5.02%，表明重复性较好。

　　2.3加标回收率的测定

　　选取空白样品做1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L3个浓度的加标回收率实验，应用上述方法进行前处理并测定，各加标水平样品平行测定3次，结果见表4。

　　5种生物胺在1.0～10.0mg/L添加水平范围内，平均回收率在82.22%～94.11%之间，相对标准偏差RSD在2.36%～7.96%之间，均符合检测要求。

　　2.4白酒样品分析

　　在当地超市随机购买5种酱香型白酒，按照本研究方法进行生物胺检测，检测结果见表5。

　　由表5可知，5种白酒中均有色胺和酪胺，β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、精胺和亚精胺均未检出。其中色胺含量在8.7～13.0?mg/L，酪胺含量在0.016～0.027?mg/L，酪胺含量明显小于色胺，色胺为5种白酒中的主要生物胺。

　　3?结论

　　目前，国内外关于酒中生物胺的研究多集中于啤酒、黄酒和红酒，对于白酒中生物胺的检测方法和生物胺分布情况研究较少。本研究所建立的方法，操作简便，灵敏度高，可用于白酒中色胺、腐胺、β-苯乙胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺的快速检测，这对于提高白酒产品质量，保障食品安全，帮助政府部门加强酒类市场监管具有重要意义。此外，与欧盟、美国相比，我国在酒中生物胺限量标准制定方面存在较大差距，本文也为相关标准的制订和完善提供参考。【壹酒购】